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ELISA试剂盒中特殊样本处理
信裕生物 / 2020-05-22

1、唾液样本:

1.1、 唾液一般饭后半小时内不易采集,因为刚进食的唾液中富含丰富的唾液淀粉酶,最好的采集的时间时空腹采集;

1.2、将样品收集于离心管后在-70 度冰冻 1 小时。 在冰上融化样品后, 10000rpm 离心 10 分钟,取上清检测;

1.3、处理样本的过程就是收集目标蛋白的过程,由于蛋白容易变性,降解,故该过程应尽量温和。样本处理之后的储存也非常重要,尤其注意不要反复冻融,样本处理之后可分装密封保存,4 度保存应小于 1 周,-20 度不应超过 1 个月,-80 度不应超过 2 个月。在标本使用前应缓慢均衡至室温,不应加热使之融解。

2、尿液样本:

2.1、无菌管收集。离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成,应再次离心;

2.2、处理样本的过程就是收集目标蛋白的过程,由于蛋白容易变性,降解,故该过程应尽量温和。样本处理之后的储存也非常重要,尤其注意不要反复冻融,样本处理之后可分装密封保存,4 度保存应小于 1 周,-20 度不应超过 1 个月,-80 度不应超过 2 个月。在标本使用前应缓慢均衡至室温,不应加热使之融解。

3、精液样本:

3.1、将精液收集于无菌容器中,正常精液射出体外呈稠厚的胶冻状,射出体外后需在室温或 37 度水浴箱中使其在前列腺分泌的纤维蛋白溶解酶的作用下液化,变的稀薄。待精液完全液化后,将精液 4000 rpm 离心 10 分钟分离精浆进行检测;

3.2、处理样本的过程就是收集目标蛋白的过程,由于蛋白容易变性,降解,故该过程应尽量温和。样本处理之后的储存也非常重要,尤其注意不要反复冻融,样本处理之后可分装密封保存,4 度保存应小于 1 周,-20 度不应超过 1 个月,-80 度不应超过 2 个月。在标本使用前应缓慢均衡至室温,不应加热使之融解。

4、粪便样本:

4.1、尽量采集干的粪便,粪便过稀会较难处理且降低检测的准确性。采集的重量应大于 50 mg,将粪便用 PBS 洗 3 次(最终粪便质量:PBS 体积=1:9),用超声粉碎(或捣碎)后于 5000×g 离心 10 分钟,取上清检测;

4.2、处理样本的过程就是收集目标蛋白的过程,由于蛋白容易变性,降解,故该过程应尽量温和。样本处理之后的储存也非常重要,尤其注意不要反复冻融,样本处理之后可分装密封保存,4 度保存应小于 1 周,-20 度不应超过 1 个月,-80 度不应超过 2 个月。在标本使用前应缓慢均衡至室温,不应加热使之融解。

5、肺泡灌洗液、脑脊液样本:

5.1、样本收集后于 1000g 离心 20 分钟,离心后收集上清,并将标本保存于-20度,且应避免反复冻融;

5.2、处理样本的过程就是收集目标蛋白的过程,由于蛋白容易变性,降解,故该过程应尽量温和。样本处理之后的储存也非常重要,尤其注意不要反复冻融,样本处理之后可分装密封保存,4 度保存应小于 1 周,-20 度不应超过 1 个月,-80 度不应超过 2 个月。在标本使用前应缓慢均衡至室温,不应加热使之融解。

6、痰液样本:

6.1、选择痰液中较为粘稠部分称重, 加两倍于痰量的 0.1% DTT(二硫苏糖醇)。DTT 的主要作用是溶解粘液,用吸管反复吹打,漩涡器振荡 15s,37 度恒温水浴振荡 5 分钟;

6.2、加入两倍于痰量的 PBS 缓冲液继续振荡 15-20 分钟,150 目的金属丝网过滤,1500 rpm 离心 10 分钟吸取上清液检测;

6.3、处理样本的过程就是收集目标蛋白的过程,由于蛋白容易变性,降解,故该过程应尽量温和。样本处理之后的储存也非常重要,尤其注意不要反复冻融,样本处理之后可分装密封保存,4 度保存应小于 1 周,-20 度不应超过 1 个月,-80 度不应超过 2 个月。在标本使用前应缓慢均衡至室温,不应加热使之融解。

7、牛乳样本:

7.1、将牛乳4°,12000g 离心 30 分钟,去除上层脂肪,以及下层沉淀,取中间层样本用于检测;

7.2、处理样本的过程就是收集目标蛋白的过程,由于蛋白容易变性,降解,故该过程应尽量温和。样本处理之后的储存也非常重要,尤其注意不要反复冻融,样本处理之后可分装密封保存,4 度保存应小于 1 周,-20 度不应超过 1 个月,-80 度不应超过 2 个月。在标本使用前应缓慢均衡至室温,不应加热使之融解。

8、细胞样本

    8.1、一瓶细胞,PBS洗2次,胰蛋白酶消化,加入适当培养液,制备成细胞悬液;

8.2、细胞悬液转入离心管中,4℃,2500rpm离心5min;

    8.3、弃掉上清,沉淀中加入遇冷的PBS,吹打混匀,4℃,2500rpm离心5min;重复一次这个步骤;

    8.4、去掉上清,加入适量细胞裂解液(细胞裂解液中加入PMSF),置于冰上,裂解30min-1h,裂解过程中可用枪头吹打或间断摇动离心管,使蛋白充分裂解;

    8.5、取出离心管,4℃,12000rpm离心5min;

    8.6、上清移入EP管中,-20℃保存。

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