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CHO-S 仓鼠卵巢细胞
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CHO-S 仓鼠卵巢细胞
CHO-S细胞;仓鼠卵巢细胞;CHO-S 仓鼠卵巢细胞
  • 市场价格:¥1800.00
  • 销售价:¥1500.00
规格:

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预计到货期:1周

本商品仅供科研之用,不可用于临床

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商品详情

规格参数

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参考文献

CHO-S 仓鼠卵巢细胞


Hamster Ovary Cells ,CHOS

细胞介绍
贴壁生长及悬浮生长均可(用于蛋白表达时,应使用悬浮生长状态,此时细胞生长状态更好,比表面积更高,生物反应器中的传质、传热效率更高,同时也可提高生物反应器空间使用效率。工业上大规模生产单抗,重组蛋白,大部分使用悬浮培养法来生产)

细胞特性
1)来源:中国仓鼠
2)形态:成纤维细胞样
3)含量:>1x106 个/mL
4)污染:支原体、细菌、酵母和真菌检测为阴性
5)规格:T25瓶或者1mL冻存管包装

运输和保存

可选择干冰运输及发送复苏存活细胞方式

(1)干冰运输,收到后立即转入液氮冻存或直接复苏;

(2)存活细胞,收到后应继续生长,传代达到细胞生长状态良好时,再进行冻存。

(3)具体操作见细胞培养步骤。

细胞用途:仅供科研使用。
                       
细胞培养步骤
一.培养基及培养冻存条件准备:

1)培养基信息:E
添加物:
L-谷氨酰胺(Sigma-Aldrich,货号:G8540-25G)
Anti-Clumping Agent(Gibco,货号:01-0057AE)
备注:CD-CHO CHO Serum-free Medium请按照培养基配制说明书配制,L-谷氨酰胺配制浓度为200mM,工作浓度为8mM(即稀释25倍,如500ml CHO Serum-free Medium 中添加20ml 200mM L-谷氨酰胺,抗结团剂使用为1%,即500ml CHO Serum-free Medium 中添加5ml 抗结团剂)
2)培养条件: 气相:空气,95%;二氧化碳,5%。 温度:37摄氏度,培养箱湿度为70%-80%。
3)冻存液:90%完全培养基,10%DMSO,现用现配。液氮储存。
二.细胞处理:
传代、转染、建库及实验室规模小试方法:
赛百慷提供的CHO-S细胞为已驯化的细胞,具有良好的适应悬浮生长及适应无血清培养基生长特性。
传代方法:
1.10cm皿中培养:使用计数器(计数器或者血球计数板计数)计数,接种密度为3×105个细胞/ml接种于提前37℃预热的新鲜培养基中(建议培养基取7-8ml,此时细胞生长状态较好),置于摇床上生长,转速为120-130rpm,湿度为70-80%,5%二氧化碳,温度为37℃。
2.培养约2-3天,细胞密度达到1×106个活细胞/ml时,应1000rpm,25℃离心5min,离心后计数(此时应稀释),然后接种密度为3×105个细胞/ml接种于提前37℃预热的新鲜培养基中。细胞数目足够时,可冻存。
也可选择125ml或者250ml摇瓶中培养细胞。(注意细胞培养液体积一般在总体积的五分之一,如在125ml摇瓶中加入25ml培养物,应注意在摇瓶中培养细胞时应将瓶盖稍微拧松,以便于气体交换,同时也不宜拧得过松,防止细胞污染)
转染方法:
在连续5代细胞密度未超过2×106个活细胞/ml时,可以使用FreeStyle Max转染试剂(Gibco,货号:16447)在CD CHO Serum-free Medium中直接转染。(注意:Anti-Clumping Agent会干扰FreeStyle Max转染试剂转染效率,同时也会干扰其他脂质体型转染试剂的转染效率)
建库方法:
若需要建库,可将细胞接种于125ml摇瓶中(接种密度为3×105个细胞/ml,总体积为25ml),此方法同样适用于稳定表达所需要蛋白的细胞株的建库工作。建库时,需要先建初级库(master bank)(一般为10支,每支细胞总数不少于4.5×107个细胞),此步骤结束后,从冻存的初级库中取出一支复苏,按照同样步骤建次级库(working bank)(相同的,一般为10支,每支细胞总数不少于4.5×107个细胞)。
实验室规模小试方法:
将挑选出的稳定细胞株从96孔板到24孔板到6孔板到10cm皿中逐级扩大培养后(此时需要注意在培养过程中应及时保种,以防止后续步骤出现污染,及应对可能的表达量衰退现象)以3×105个细胞/ml接种于125ml摇瓶中,转速为120-130rpm,温度为37℃,湿度为70-80%,连续培养一周,每天取样做出相应的细胞生长曲线,细胞活率曲线,蛋白表达曲线,可根据实际情况,每天取样测出培养基中葡萄糖含量,以便决定是否需要补加葡萄糖,同时可使用CHO Feed Bioreactor Supplement作为细胞发酵中补料,同时做出相应的细胞生长曲线,细胞活率曲线,蛋白表达曲线,为中试放大补料添加做出合理数据支持。

注意事项

冻存细胞接收后的处理:
1.干冰运输,收到细胞后立即转入-80℃冰箱短暂中转或直接复苏;
2.收到细胞后,若发现干冰已经完全挥发、冻存管瓶盖破裂脱落,请立即拍照后与我们联系。
复苏细胞接收后的处理:
1.收到细胞后,请首先检查培养瓶是否破损或漏液,培养液是否混浊,如有漏液及培养液混浊情况请立即拍照把图片发给我们。
2.75%酒精消毒瓶身后放培养箱中静置4-6h后,在显微镜下确认细胞状态并拍照100倍和200倍的照片,若有贴壁细胞脱落,可收集上清离心,将沉淀用新的培养基接种至新的培养瓶或培养皿中。
3.建议收到当天不要消化处理,如果细胞长满90%,可选择传代处理。
4.如您收到细胞3天内没有反馈相关问题,出现的细胞问题将不提供免费重发服务。
细胞培养方法:
1、细胞传代:细胞密度达到80-90%时即可传代
①弃去培养上清,用PBS或生理盐水清洗1-2次;
②加入2ml0.25%胰酶(T25瓶),使胰酶覆盖整个瓶或皿,盖好放入培养箱消化;
③1-2min后,显微镜下观察细胞,若大部分细胞回缩且有少量细胞脱落,轻轻吹打下确认消化情况后加入完全培养基终止消化;若细胞还是贴壁,放回培养箱继续消化至可以轻轻吹打下为止;
④将细胞悬液1000RPM左右条件下离心4min,弃上清;
⑤用新鲜培养基重悬后加入培养瓶或皿中,T25培养瓶加6-8ml培养基;
⑥悬浮细胞直接离心收集,细胞沉淀重悬后分到新培养瓶中。
2、细胞复苏:
①将冻存管在37℃温水中快速摇晃融化,时间1min左右,加入4-5ml培养基混匀。
②在1000RPM左右条件下离心4min,弃上清,加1-2ml培养基吹匀,将细胞悬液加入培养瓶中,补加适量培养基。
3、细胞冻存:待细胞生长状态良好时进行细胞冻存保种
①弃去培养上清,用PBS或生理盐水清洗1-2次,加入1mL 0.25%胰蛋白酶(T25瓶)
②1-2min后,显微镜下观察细胞,大部分细胞回缩且有少量细胞脱落,轻轻吹打下确认消化情况后加入完全培养基终止消化;
③将细胞悬液1000RPM左右条件下离心4min,弃上清,加1ml冻存液重悬细胞;
④将冻存管放入程序降温盒,放入-80℃冰箱,4小时后将冻存管转入液氮罐储存。



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