BY4741 感受态细胞
中文名:BY4741 感受态细胞
英文名:BY4741 Chemically Competent Cell
CAS:N/A级别:N/A
分子量:N/A分子式:N/A
纯度:N/A储存条件:-80°C
产品简介
产品组成:
基因型:
MATa his3Δ1 leu2 met15Δ ura3-52
产品说明:
BY4741 菌株来源于酿酒酵母原始菌株——S288C,是实验室的常用菌株,为配子 MATa 型,广泛应用于钠,钾离子平衡;细胞抗盐;各种金属离子的吸收;重金属毒性;各种糖类,碳源对真核生物细胞生长的影响;过氧化物,超氧化物的吸收与运输的研究中。BY4741 酿酒酵母为组氨酸、亮氨酸、甲硫氨酸 、尿嘧啶缺陷型菌株,可直接通过 PEG/LiAc 将 pYES2 质粒转化进入 BY4741 细胞内。质粒 pYES2 的筛选标志为 URA,可用 SD-URA 板板进行筛选。BY4741 感受态细胞经特殊工艺制作,-80℃可保存六个月,pYES2 质粒检测转化效率>103 cfu/μg DNA。
使用方法:
1.取 100 µl 冰上融化的 BY4741 感受态细胞,依次加入预冷的目的质粒 1-3 µg,Carrier DNA (96℃水浴 3 min,快速冰浴 3 min,重复一次) 10 µl,PEG/LiAc 500 µl 并吸打几次混匀,30℃水浴 30 min (15 min 时翻转 6-8 次混匀)。
2.将感受态移到 42℃水浴 15 min (7.5 min 时翻转 6-8 次混匀)。
3.5000 rpm 离心 40 s 弃上清,ddH2O 400 µl 重悬,离心 30s 弃上清。
4.ddH2O 50 µl 重悬,涂板,29℃培养 48-96 h。
注意事项:
1.感受态细胞最好在冰上融化。
2.若使用 pYES2 质粒表达蛋白,需在培养基中加入 2%的半乳糖(筛选培养基中不用加半乳糖;当需要目的蛋白表达时,需加入半乳糖代替葡萄糖作为碳源),以诱导目的基因的表达。
3.转化高浓度的质粒可相应减少最终用于涂板的菌量。
4.同时转化 2-3 种质粒时可增加质粒的用量。
5.酵母为真核生物,不易长期保存,随感受态在-80℃保存时间的延长,转化效率会不断下降,建议保存时间不超过 90 天。
6.BY4741 酵母菌株对高温敏感,最适生长温度为 27-30℃;高于 31℃,生长速度和转化效率呈指数下降。
7. 酵母在缺陷培养基中生长速度比 YPDA 培养基慢,培养基中缺陷成分越多,生长越慢,以转化涂板为例:涂 YPDA 平板 29℃,48 h 培养可见直径 1 mm 克隆;涂 SD 单缺平板 29℃,48-60 h 培养可见直径 1 mm 克隆,涂 SD 双缺 平板 29℃,60-80 h 培养可见直径 1 mm 克隆,涂 SD 三缺或四缺平板平板 29℃,80-90h 培养可见直径 1 mm 克隆。