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改良Lillie-Mayer苏木素染色液 XY90001DH

改良Lillie-Mayer苏木素染色液

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改良Lillie-Mayer苏木素染色液

产品简介:

苏木素(Hematoxylin)和伊红(Eosin)联合染色简称HE染色,是病理学和组织学很常用的一种染色方法。苏木 精为碱性天 然染料,可使细胞核着色。细胞核内染色质的主要成分是DNA,在DNA的双螺旋结构中,两条核苷酸链上的磷酸基向外,使DNA双螺旋的外侧带负电荷,呈酸性,很容易与带正电荷的苏木 精碱性染料以离子键或氢键结合而被染色。

改良Lillie-Mayer苏木素染色液无毒,无氧化膜,细胞核染色质着色深而细微,临床上常替代Harris苏木素染色液。对细胞核染色很清晰,不着染胞质和纤维成分,属进行性染色,故染色后可以不用盐酸乙醇分化,染色时间约5~8min,如果是充分氧化后可染色3~5min。常用于糖原等特染、酶组化和免疫组化等染色后复染细胞核作对照染色,尤其适用于经过特殊染色后不能经酸处理时对细胞核的复染。在特殊染色中,常与天青石蓝B液联合染色,使细胞核染色后不被后续的酸性染料所褪色。

染色原理:

细胞核染色的原理:

苏木素为碱性天 然染料,可使细胞核着色。细胞核内染色质的成分主要是DNA,在DNA双螺旋结构中,两条核苷酸链上的磷酸基向外,使DNA双螺旋的外侧带负电荷,呈酸性,很容易与带正电荷的苏木素碱性染料以离子键或氢键结合而被染色。苏木素在碱性溶液中呈蓝色,所以细胞核被染成蓝色。

细胞浆染色的原理:

伊红是一种化学合成的酸性染料,在一 定条件下可使细胞浆着色。细胞浆的主要成分是蛋白质,为两性化合物,细胞浆的染色与染液的pH值密切相关。当染色液pH值在胞浆蛋白质等电点(4.7~5.0)以下时,胞浆蛋白质以碱式电离,则细胞浆带正电荷,就可被带负电荷的酸性染料染色。伊红在水中离解成带负电荷的阴离子,与胞浆蛋白质带正电荷的阳离子结合,使细胞浆着色,呈现红色。

分化作用:

染色后,用某些特定的溶液将组织过多结合的染色剂脱去,这个过程称为分化作用,所用的溶液称为分化液。在HE染色中常用1%盐酸乙醇作为分化液,因酸能破坏苏木素的醌型结构,使组织与色素分离而退色。大多数组织经苏木素染色后,必须用1%盐酸乙醇分化,使细胞核过多结合的苏木素染料和细胞浆吸附的苏木素染料脱去,再进行伊红染色,才能保证细胞核与细胞浆染色的分明。

返蓝作用:

 分化之后,苏木素在酸性条件下处于红色离子状态,呈红色;在碱性条件下处于蓝色离子状态,呈蓝色。组织切片经酸性乙醇分化后呈红色或粉红色,立即用水除去组织切片上的酸而中止分化,再用弱碱性水使苏木素染上的细胞核呈现蓝色,这个过程称为返蓝作用或蓝化作用。另外用自来水浸洗也可使细胞核返蓝,但所需时间较长。

改良Lillie-Mayer苏木素染色液

100ml

500ml

RT

使用说明书

1份

自备材料:

1、酸性乙醇分化液

2、蓝化液,如稀氨水、碳酸 锂溶液等

3、系列乙醇

4、伊红染色液

5、4%多聚甲醛

 

操作步骤(仅供参考):

(一)石蜡切片染色

1、 切片脱蜡至水

①二甲苯作用2次,每次5~10min。

②(可选)无水乙醇作用2次,每次3~5min。                       

③95%的乙醇                                  3~5min

④90%的乙醇                                  3~5min

⑤80%的乙醇                                  3~5min

⑥自来水或蒸馏水冲洗                          1~3min

2、染色

①改良Lillie-Mayer苏木素染色液染色            5~8min

②自来水或蒸馏水冲洗                          5~10s

③(可选)盐酸乙醇分化                           2~5s

④自来水冲洗                                  20~30s

⑤(可选)蓝化液返蓝                            20~40s

⑥自来水冲洗                                 30~60s

⑦伊红染色液染色                              3~5min

⑧自来水冲洗                                  1~5s

3、脱水、透明、封固

①80%乙醇                                   10~20s

②90%乙醇                                   10~20s

③95%乙醇作用2次,每次1~2min。

④无水乙醇作用2次,每次2~3min。

⑤二甲苯透明3次,每次2~3min。

⑥中性树脂封片。

染色结果:细胞核呈蓝色;细胞质、肌纤维、胶原纤维等呈深浅不一的红色;角蛋白、红细胞等呈明亮的橙红色。

 

(二)冰冻切片染色

1、乙  醚-乙醇混合固定液                       5~10s

2、自来水冲洗                                2~5s

3、改良Lillie-Mayer苏木素染色液滴染1~2min(可加热至50℃)。          

4、自来水冲洗                                2~5s

5、(可选)盐酸乙醇分化                         2~5s

6、自来水冲洗                                2~5s

7、(可选)蓝化液返蓝                           2~5s

8、自来水冲洗                                5~10s

9、伊红染色液染色                            2~5s

10、自来水冲洗                               1~2s

11、80%的乙醇                               1~2s

12 、95%的乙醇                              1~2s

13、无水乙醇                                 2~5s

14、苯酚二甲苯(1:3)                           2~5s

15、二甲苯透明3次,每次2~5s。

16、中性树脂封片

染色结果:细胞核呈蓝色;细胞质、纤维呈红色。

 

(三)细胞染色

1、4%多聚甲醛固定10~20min。

2、自来水冲洗2次,每次2min。

3、蒸馏水冲洗2次,每次2min。

4、染色、脱蜡、透明、封固步骤同石蜡切片的染色步骤,作用时间应相应缩短。

染色结果:细胞核呈蓝色;细胞质、纤维呈红色。

 

注意事项:

1、 切片脱蜡应尽量干净。

2、 系列乙醇应经常更换新液。

3、 盐酸乙醇分化时间应根据切片厚薄、组织类别以及新旧而定,另外分化后自来水冲洗时间应该足够,以便彻底清洗酸。

4、 乙  醚-乙醇混合固定液是由乙  醚和95%乙醇等量混合而得,再加入适量乙酸,密闭保存。

5、 冷冻切片染色时间尽量要短。

6、 蓝化液常使用0.2~1%氨水或Scott促蓝液或0.1~1%碳酸 锂溶液。

7、 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

 

有效期: 12个月有效。

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