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Klenow Fragment(exo-) XY9A4000

Klenow Fragment(exo-)

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Klenow Fragment(exo-)

描述:

Klenow 片段(3´→5´ exo-)是 DNA 聚合酶 I 的 N末端截短物,它保留了 DNA 聚合酶活性,但失去了 5´→3´核酸外切酶活性。该酶进一步经突变(D355A,E357A)去除了其 3´→5´的核酸外切酶活性。因此该 DNA 聚合酶无任何外切酶活性,仅包含了 DNA 聚合酶活性,广泛用于标记探针制备、cDNA 第二条链的合成等建库试验。

2022040801385872667

单位定义 

一个活力单位即在 37°C 条件下,30 分钟内催化 10 nmoldNTP 的掺入反应成为酸不溶性物质所需的酶量。

10×Klenow Buffer: 500 mM Tris-HCl (pH 8.0 at 25 °C), 50mM MgCl2, 10 mM DTT. 该酶兼容 PCR Buffer 和内切酶Buffer。

应用: 

(1)用随机引物制备探针 

(2)随机引物法标记(3)cDNA 第二条链的合成 

(4)该酶不能用于产物平端不齐

失活:75°C,20min 失活。

储存:-20℃可保存 3 年。

随机引物生物素标记反应 

1. 按以下组分配制反应液

2022040801400121332

95°C 5min 冰上放置 5min。 

2. 聚合反应 

加入 1 μl Klenow Fragment(exo-),混合均匀。37°C 反应 15min,75°C 20min 失活。

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