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热稳定腺苷化DNA/RNA连接酶 XY9D2902

热稳定腺苷化DNA/RNA连接酶

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热稳定腺苷化DNA/RNA连接酶

描述:

5’AppDNA/RNA 热稳定连接酶来自嗜热碱甲烷杆菌(Methanobacterium thermoautotrophicum),是 RNA 连接酶催化亚基的赖氨酸点突变体。该酶催化的连接不依赖于ATP,但需要 5’预腺苷化的接头才能将其连接到 RNA 或单链 DNA 的 3’OH 末端。该酶也可催化 3’端被 2’-O-甲基化的RNA 和 5’预腺苷化接头的连接反应。连接反应的最适反应温度为 60-65℃。即使在 ATP 存在的情况下,该连接酶也不能使 RNA 或单链 DNA 的 5’端磷酸发生腺苷化,因此降低非特异性的串联和环化。该酶为热稳定型,最佳反应温度为65℃,此温度下降低了 RNA 的二级结构,大大提高连接效率。

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应用:

二代测序文库构建中连接单链 DNA 和腺苷化的 DNA 接头。构建小 RNA 二代测序文库,可在较高温度下连接预腺苷化的接头和 RNA。

储存:-20℃可保存 3 年。

使用注意事项

(1)1×AppDNA/RNA Ligase Buffer:10 mMBis-Tris-Propane- HCl pH 7.0,10 mM MgCl2,1mM DTT。

(2)该酶只能连接 5’-端预腺苷化的 Oligo 接头到单链 DNA或 RNA 的 3’-OH 基团。

(3)当腺苷化底物的 5’-端第一个碱基为“C”时,连接效率较差。

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2. 65°C 孵育 1h。 

3. 95°C 3min,终止反应。

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