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大肠杆菌BL21-CodonPlus(DE3)-RIPL化学感受态细胞 XY91152CC

E. coli BL21 - CodonPlus (DE3) - RIPL chemical cells

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大肠杆菌BL21-CodonPlus(DE3)-RIPL化学感受态细胞

产品及特点

本产品来源于 Stratagene 公司的 BL21-Gold 菌株,缺少 Lon 蛋白酶和 OmpT 蛋白 酶,从而减少对重组蛋白的降解,补充大肠杆菌缺乏的 4 种稀有密码子( AGA、AUA、CCC、 CUA) 对应的 tRNA (argU、ileY、proL、leuW),提高外源基因,尤其是富含 AT-或 GC- 的真核基因在原核系统中的表达水平。该菌株染色体整合了λ噬菌体 DE3 区(DE3 区含有 T7 噬菌体 RNA 聚合酶),可同时表达 T7 RNA 聚合酶和大肠杆菌 RNA 聚合酶,可用于 pET 系列,pGEX,pMAL 等质粒的蛋白表达,同时具有四环素,氯霉素,链霉素,壮观霉素 抗性。本产品由特殊工艺制作,经 pUC19 质粒检测转化效率高达 108cfu/μg。

菌株基因型为:F - ompT hsdS (rB -mB -) dcm+ Tet r galλ(DE3) endA Hte [argU proL Camr] [argU ileY leuW Strep/Spec r]

规格及成分

运输及保存 干冰运输、-80℃保存,有效期半年。

自备试剂 目的 DNA、SOC 或 LB 培养基等

使用方法

1. 取感受态细胞置于冰浴中。一次转化感受态细胞的建议用量为 50-100μL,可以根据 实际情况分装使用。 以下实验以 50 μL 感受态细胞为例。

2. 待感受态细胞融化后,向感受态细胞悬液中加入目的 DNA(根据实际情况加入适量 的 DNA,通常 100 μL 感受态细胞能够被 1 ng 超螺旋质粒 DNA 所饱和),用移液器 轻轻吹打混匀,冰浴 30 分钟。

3. 42℃热击 45 秒,迅速将离心管转移到冰浴中,冰上静置 2-3 分钟。

4. 每个离心管中加入 450 μL 无菌的 SOC 或 LB 培养基(不含抗生素),混匀后置于 37℃ 摇床,150 rpm 振荡培养 45 分钟使菌体复苏。

5. 根据实验需求,取适量已转化的感受态细胞,加到含相应抗生素的 SOC 或 LB 固体 琼脂培养基上,用无菌的涂布棒将细胞均匀涂开,将平板置于 37℃直至液体被吸收, 倒置培养,37℃培养 12-16 小时。

仅用于科研,不能用于临床诊断!所有产品仅供科研使用,不得用于人或动物的治疗等任何其他用途,不为任何个人提供产品和服务。

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