FlaPure Plant Total RNA Extraction Kit 植物总RNA提取试剂盒（离心柱型）

产品组成

保存条件

本试剂盒中 RNase-Free DNase I 和 DNase Buffer 置于-20 ℃保存，其余组分常温（10~25℃）保存 18 个月。

产品简介

本产品适合于从 10~200 mg 普通植物中提取总 RNA。试剂盒基于硅胶柱纯化技术，提取过程中无需使用有毒的酚氯仿抽提，整个提取过程只需 20~30 min。试剂盒采用 DNase I 膜上消化，可高效地去除 DNA，得到的 RNA 可直接用于 RT-PCR、Northern Blot、Poly A 纯化，核酸保护和体外翻译等实验。

产品特点

操作简便：20~30 min 内完成数个样品的总 RNA 提取；

高效去除基因组 DNA：DNase I 膜上消化，高效去除 DNA；

安全低毒：无需酚、氯仿等有毒试剂；

RNA 纯度高：提取的 RNA 无杂质残留，适用于对纯度、完整性要求很高的下游实验。

本产品适用于普通植物样品的总 RNA 提取。

注意事项

1. 第一次使用前应在漂洗液 PRW1 中加入 4 倍体积的无水乙醇；

2. DNase I 工作液的配制：10 µL DNase I + 60 µL DNase Buffer，轻轻吹打混匀，现用现配；

3. 使用无 RNase 的塑料制品和枪头避免交叉污染，经常更换新手套。因为皮肤经常带有细菌、汗液及 RNase 等，可能导致 RNA 降解；

4. RNA 在裂解液 PRL 中时不会被 RNase 降解。但提取后继续处理过程中应使用不含 RNase 的塑料和玻璃器皿。玻璃器皿可在 150℃烘烤 4 h，塑料器皿可在 0.5 M NaOH 中浸泡 10 min，然后用水彻底清洗、灭菌；

5. 配制溶液如 50%、70%乙醇应使用 RNase-Free ddH₂O（将水加入干净的玻璃瓶中，加 DEPC至终浓度为 0.1%(V/V)，混匀放置过夜后高压灭菌）；

使用方法

1. 样品处理：用液氮将植物样品研磨成细小粉末。称取 10~200 mg 粉末至 1.5~2.0 mL 预冷的离心管中（加裂解液前样品不能解冻，初次使用推荐样品量为 30~50 mg，根据结果再调整用量）；

2. 立即加入 600 µL Buffer PRL 及 20 µL β-巯基乙醇（自备）至样品中，高速涡旋 20~60 s 混匀样品，室温静置 5 min；

3. 室温下 14,000×g 离心 5 min；

4. 将 RNase-Free FlaPure gDNA Remove Column 装在 2 mL 收集管中，把上一步的上清液转移至柱子中。12,000×g 离心 1 min，弃去柱子，保留滤液；

5. 取 0.5 倍体积无水乙醇加入滤液中，用移液枪吸打 3~5 次；

6. 将 RNase-Free FlaPure RNA Column 装在 2 mL 收集管中。取上一步混合液（≤750 µL）至柱子中。12,000×g 离心 1 min；

7. 弃滤液，把柱子装回收集管中。取剩余混合液至柱子，12,000×g 离心 1 min；

8. 弃滤液，把柱子装回收集管中。加入 500 µL Buffer PRW，10,000×g 离心 10 s；

9. 弃滤液，把柱子装回收集管中，加入 70 µL 配置好的 DNase I 溶液至柱子膜中央（DNase I 溶液：10 µL DNase I+60 µL DNase Buffer，轻轻吹打混匀）。室温放置 15 min。

10. 加入 500 µL Buffer PRW，室温静置 1 min，13,000×g 离心 1 min；

11. 弃滤液，把柱子装回收集管。加入 500µL Buffer PRW1（已添加指定量无水乙醇）至柱子中，10,000×g 离心 10 s；

12. 重复步骤 11；

13. 弃滤液，把柱子装回收集管。13,000×g 离心 2 min，开盖置于室温放置数分钟，以彻底晾干吸附材料中残留的漂洗液；

注意：此步骤目的是将吸附柱中残余的漂洗液去除，漂洗液的残留，可能会影响后续的 RT 等实验。

14. 将柱子转移至 1.5 mL 离心管。加入 30~100 µL RNase Free ddH₂O 至吸附膜中央。室温静置

3 min。12,000×g 离心 1 min（柱子最小的洗脱体积是 30 µL，若 RNA 产量超过 30 µg，推荐进行第二次洗脱）弃去柱子，将洗脱的 RNA 置于-80 ℃保存。

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