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小鼠黄素单核苷酸(FMN)ELISA试剂盒

小鼠

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¥ 1584.00 /盒
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¥1980.00
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小鼠黄素单核苷酸(FMN) 酶联免疫分析 试剂盒使用说明书 96T 

检测范围: 3pg/ml-150pg/ml 

使用目的: 本试剂盒用于测定小鼠血清、血浆及相关液体样 本中黄素单核苷酸(FMN)含量。 

实验原理: 本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中小鼠黄 素单核苷酸(FMN)水平。用纯化的小鼠黄素单核苷酸 (FMN)抗体包被微孔板,制成固相抗体,往包被单抗 的微孔中依次加入黄素单核苷酸(FMN),再与 HRP 标 记的黄素单核苷酸(FMN)抗体结合,形成抗体-抗原- 酶标抗体复合物,经过彻底洗涤后加底物 TMB 显色。 TMB 在 HRP 酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用 下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的黄素单 核苷酸(FMN)呈正相关。用酶标仪在 450nm 波长下测 定吸光度(OD 值),通过标准曲线计算样品中小鼠 黄素单核苷酸(FMN)浓度。

试剂盒组成:


 

Reagent

Quantity

酶标包被板

12well×8strips

标准品:240pg/ml

1×0.5ml

标准品稀释液

1×1.5ml

酶标试剂

1×6ml

样品稀释液

1×6ml

显色剂 A 液

1×6ml

显色剂 B 液

1×6ml

终止液

1×6ml

30 倍浓缩洗涤液

1×20ml×30flod

说明书

1

封板膜

2

密封袋

1


 

样本处理及要求:

1.血 清 :室温血 液 自 然凝 固 10-20 分 钟 , 离 心 20 分 钟左右(2000-3000 转/分) 。仔细收集上清,保存 过程中如出现沉淀,应再次离心。

2.血浆:应根据标本的要求选择 EDTA 或 柠檬 酸钠 作 为抗凝剂,混合 10-20 分钟后,离心 20 分 钟 左 右 ( 2000-3000 转 / 分 ) 。 仔细 收集 上清, 保存过 程中 如 有沉淀形成,应该再次离心。

3.尿液:用无菌管收集,离心 20 分钟左右(2000-3000 转/分)。仔细收集上清,保存过程中如有沉淀形成, 应再次离心。胸腹水、脑脊液参照实行。

 

4.细胞培养上清 :检测分泌性的成份时,用无菌管收 集。离心 20 分钟左右(2000-3000 转/ 分)。仔细 收集上清。检测细胞内的成份时,用 PBS(PH7.2-7.4 ) 稀 释细胞 悬液 ,细胞 浓度 达 到 100 万 / ml 左 右。 通 过反复冻融,以使细胞破坏并放出细胞内成份。离心 20 分钟左右(2000-3000 转/分)。仔细收集上清。 保存过程中如有沉淀形成,应再次离心。

5.组织标本:切割标本后,称取重量。加入一定量的 PBS ,PH7.4 。用液氮迅速冷冻保存备用。标本融化后 仍然保持 2-8 ℃的温度。加入一定量的 PBS(PH7.4 ), 用手工或匀浆器将标本匀浆充分。离心 20 分钟左右 (2000-3000 转/分)。仔细收集上清。分装后一份待 检测,其余冷冻备用。

6.标本采集后尽早进行提取,提取按相关文献进行, 提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验,可将 标本放于-20℃保存,但应避免反复冻融.

7.不 能检测含 NaN3 的样品,因 NaN3 抑 制辣根 过氧 化物酶的(HRP )活性。

 

操作步骤:

1. 标准品:其浓度为 240pg/ml(贮液) ,再准备 5 个 稀释标准品的 EP 管,每个 EP 管中加入 150μL 的 标 准 品 稀 释 液 , 如 图 所 示 依 次 倍 比 稀 释 成 240pg/ml,120pg/ml,60pg/ml,30pg/ml,15pg/ml,7.5pg/ ml,标准品稀释液(0pg/ml)直接作为空白孔。为保证实 验结果有效性,每次实验请使 用新的标准品溶液。

Tube

0

1

2

3

4

5

pg/ml 

240

120

60

30

15

7.5


2. 加样 :分 别设空白孔 (空白对照 孔不 加样品 及 酶标试剂,其余各步操作相同)、待测样品孔。在酶 标包被板上待测样品孔中先加样品稀释液 40 μl,然 后再加待测样品 10μ(l 样品最终稀释度为 5 倍) 。 加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻 轻晃动混匀。

3. 温育:用封板膜封板后置 37℃温育 30 分钟。

4. 配液:将 30 倍浓缩洗涤液用蒸馏水 30 倍稀释后 备用。

5. 洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔 加满洗涤液,静置 30 秒后弃去,

如此重复 5 次,拍干。

6. 加酶:每孔加入酶标试剂 50μl,空白孔除外。 7. 温育:操作同 3 。

8. 洗涤:操作同 5 。

9. 显色:每孔先加入显色剂 A 50μl,再加入显色 剂 B 50μl,轻轻震荡混匀,37℃避光显色 15 分钟. 10. 终止:每孔加终止液 50μl,终止反应(此时蓝色立转黄色) 。

11. 测定 :以 空白孔 调零,450nm 波长依序 测量各 孔的吸光度(OD 值)。测定应在加终止液后 15 分钟 以内进行。

 

注意事项:

1 . 试 剂 盒从 冷 藏 环 境 中 取 出应 在 室 温 平 衡 15-30 分钟后方可使用,酶标包被板开封后

如未用完,板条应装入密封袋中保存。

2.浓洗涤液可能会有结晶析出,稀释时可在水浴中 加温助溶,洗涤时不影响结果。

3.各步加样均应使用加样器,并经常校对其准确性, 以避免试验误差。一次加样时间

最好控制在 5 分钟内,如标本数量多,推荐使用排枪 加样。

4. 请每次测定的同时做标准曲线,最好做复孔。如 标本中待测物质含量过高(样本 OD 值大于标准品孔 第一孔的 OD 值),请先用样品稀释液稀释一定倍数 (n 倍)后再测定,计算时请最后乘以总稀释倍数(× n×5) 。

5.封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。

6.底物请避光保存。

7.严格按照说明书的操作进行,试验结果判定必须 以酶标仪读数为准.

8.所有样品,洗涤液和各种废弃物都应按传染物处 理。

9.本试剂不同批号组分不得混用。

计算:

以标准物的浓度为横坐标,OD 值为纵坐标, 在坐标纸上绘出标准曲线,根据样品的 OD

值由标准曲线查出相应的浓度;再乘以稀释 倍数;或用标准物的浓度与 OD 值计算出标 准曲线的直线回归方程式,将样品的 OD 值 代入方程式,计算出样品浓度,再乘以稀释 倍数,即为样品的实际浓度。

 

试剂盒性能:

1. 样 品 线 性回 归 与 预 期浓度 相 关系 数 R 值 为 0.990 以上。

1.批内与批见应分别小于 9% 和 11%

2.保存条件及有效期:

a.试剂盒保存:2-8℃。

b.有效期:6 个月




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